什么是LAMP?
“LAMP”(環介導等溫擴增,Loop-mediated Isothermal Amplification)是一種由栄研化學株式會社獨自開發的簡單、快速、高特異性且成本低廉的核酸擴增方法。
其特點是使用4種不同的引物,專門設計用于識別目標基因的6個特定區域,反應過程在恒溫下通過鏈置換反應進行。基因的擴增和檢測可以在單一步驟中完成——將樣品、引物、具有鏈置換活性的DNA聚合酶及底物混合后,在恒定溫度(約65°C)下孵育即可。
該方法具有高擴增效率,DNA可在15至60分鐘內擴增至10^9–10^10倍。由于其高度特異性,擴增產物的存在即可指示目標基因的存在。

如何設計引物?
根據目標基因的以下6個特定區域設計4種類型的引物:
3’ 端區域:F3c、F2c 和 F1c
5’ 端區域:B1、B2 和 B3
有關引物、LAMP 原理及技術信息的更多內容,請參閱 Eiken Genome 網站
(https://primerexplorer.eiken.co.jp/e/)
每個引物區域可以通過使用 PrimerExplore(LAMP 引物設計專用軟件)確定,在設計時需考慮堿基組成、GC 含量以及二級結構的形成。引物的熔解溫度(Tm)可通過 Nearest Neighbor 方法計算得到。
