什么是LAMP?
“LAMP”(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增,Loop-mediated Isothermal Amplification)是一種由栄研化學(xué)株式會(huì)社獨(dú)自開(kāi)發(fā)的簡(jiǎn)單、快速、高特異性且成本低廉的核酸擴(kuò)增方法。
其特點(diǎn)是使用4種不同的引物,專門設(shè)計(jì)用于識(shí)別目標(biāo)基因的6個(gè)特定區(qū)域,反應(yīng)過(guò)程在恒溫下通過(guò)鏈置換反應(yīng)進(jìn)行。基因的擴(kuò)增和檢測(cè)可以在單一步驟中完成——將樣品、引物、具有鏈置換活性的DNA聚合酶及底物混合后,在恒定溫度(約65°C)下孵育即可。
該方法具有高擴(kuò)增效率,DNA可在15至60分鐘內(nèi)擴(kuò)增至10^9–10^10倍。由于其高度特異性,擴(kuò)增產(chǎn)物的存在即可指示目標(biāo)基因的存在。

如何設(shè)計(jì)引物?
根據(jù)目標(biāo)基因的以下6個(gè)特定區(qū)域設(shè)計(jì)4種類型的引物:
3’ 端區(qū)域:F3c、F2c 和 F1c
5’ 端區(qū)域:B1、B2 和 B3
有關(guān)引物、LAMP 原理及技術(shù)信息的更多內(nèi)容,請(qǐng)參閱 Eiken Genome 網(wǎng)站
(https://primerexplorer.eiken.co.jp/e/)
每個(gè)引物區(qū)域可以通過(guò)使用 PrimerExplore(LAMP 引物設(shè)計(jì)專用軟件)確定,在設(shè)計(jì)時(shí)需考慮堿基組成、GC 含量以及二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成。引物的熔解溫度(Tm)可通過(guò) Nearest Neighbor 方法計(jì)算得到。
